秀灵™ Protein AGL HRP探针
秀灵™ Protein AGL HRP探针
本产品是辣根过氧化物酶（HRP）标记的独家protein-AGL重组蛋白探针，主要应用于蛋白印记，酶免疫测定和细胞免疫化学等的检测。公司自主研发的protein-AGL重组蛋白探针对一抗的种属来源无特异选择性，可结合谱涵盖所有生物医学科研常用抗体类型和亚型，且与一抗的结合能力高于特异的一抗和二抗的结合能力，是一种新型高效、高检测灵敏度的HRP标记探针。其次，Protein AGL-HRP只检测天然活性抗体，不检测变性的抗体，在使用该探针对IP产物做免疫印迹检测时，只检测与抗原结合的一抗，不检测与IP产物相伴的变性抗体。
| 产品组成 | 包装 |
秀灵™ Protein AGL HRP探针 | 1mL，1mg/mL |
产品特点
1、通用性——完全替代传统的HRP标记二抗，可与任意来源的一抗结合；
2、高效性——探针没有动物和免疫原变异性，只检测有天然活性表面构象的抗体，因而它在免疫沉淀之后的免疫印迹检测中仅检测与抗原结合的活性一抗，避免了常规二抗检测中与免疫沉淀相伴的变性一抗重链和轻链条带的干扰（如下图1）；
3、结合能力强，灵敏度高——针对各类抗体及片段有多个协同结合位点，而常规二抗探针受困于针对变性抗体的杂质抗体在固相上的吸附本底，因而探针的检测灵敏度更高。
图1：上图为鼠IgG，下图为兔IgG；左边为羊二抗HRP探针检测，右边为Protein AGL-HRP探针检测；1、2、3、4带所含IgG量分别为1、2、4和8μg。结果表明，SDS变性还原的IgG不与Protein AGL-HRP探针结合。
储存条件
● 0.15M PBS（1.47mM KH2PO4，8.1mM Na2HPO4 ，137mM NaCl，2.68mM KCl）pH 7.4；
● 加等体积的灭菌甘油后混匀保存在-20℃，一年有效（注意：加等体积甘油后抗体浓度减半）。
推荐稀释比例
酶免疫测定：1:500 — 1:100000
Western blotting ：1:2000 — 1:200000
免疫组化染色：1:500 — 1:10000
对于Western blotting 中使用不同显色试剂显色，探针推荐稀释比例：
① Pierce ECL Western Blotting Substrate：1:5000 — 1:100000
②Supersignal West Pico Substrate ：1:10000 — 1:200000
③Pierce ECL plus Western Blotting Substrate ：1:10000 — 1:500000
④ beyoECL Plus WB Substrate：1:500 — 1:200000
⑤Amersham ECL Prime ：1:50000 — 1:400000
Protein AGL 探针对比二抗探针的取代性优势
| Protein AGL探针 | 二抗探针 |
| 优势一：对一抗的宿主和类型的结合谱广 | |
| 单一探针可以涵盖Protein A，G和L所有免疫球蛋白的结合谱，检测除IgY之外所有生物医学常用宿主动物的免疫球蛋白，包括抗体的种类如IgG、IgM、IgA、IgE和IgD、它们的亚类以及片段如Fab、scFv和sdAb等。 | 针对不同的一抗宿主、亚型和片段，需要制备不同的二抗探针，极为复杂和混乱。 |
| 优势二：特异性强 | |
| 仅与天然活性免疫球蛋白的表面构象位点结合，不与丧失该位点的失活或变性的免疫球蛋白结合。所以，仅检测结合抗原的活性一抗，不与变性样品的任何成分结合，避免了IP抗体以及样品内源性免疫球蛋白交叉反应的干扰。 | 作为多抗，含有针对变性的IP一抗或样品内源性免疫球蛋白的抗体成分，它造成非靶点信号，严重干扰目的抗原的特异检测。 |
| 优势三：灵敏度高 | |
| 对给定的免疫球蛋白有重、轻链多个位点的协同结合效应，结合检测信号强；单组份、高水溶性探针在固相上的非特异吸附弱，本底低。因而，结合信号和本底信号的高比值产生了高检测灵敏度。 | 在二抗的多抗成分中，只有针对天然活性一抗表面构象抗原决定基的抗体产生特异检测信号，而那些针对变性抗原决定基的抗体在固相表面的吸附只会造成本底；此外，含疏水区的免疫球蛋白在微孔板和印迹膜等固相上的非特异吸附比较严重。上述两种非特异本底降低了检测灵敏度。 |
| 优势四：生产变异性小 | |
| 组份单一，成分固定。 | 动物和免疫原变异性大。 |
对比数据
使用Protein A/G/L-HRP作为二抗可有效区分天然构象与变性构象的抗体
通过构建异源抗体检测体系验证了AGL-HRP探针的构象特异性识别优势。实验设计如下：采用小鼠来源IgG2型单克隆抗体作为捕获抗体实施免疫沉淀，以兔多克隆抗体作为检测抗体进行Western Blot分析。该策略通过物种差异有效规避传统同源抗体系统（同物种捕获/检测抗体）可能引发的交叉识别问题，从而精确解析AGL-HRP的构象依赖性结合特性。
AGL-HRP探针具有双重选择性：
(1) 物种选择性：通过Protein A/G/L组合优化，优先结合兔源IgG（检测抗体）
(2）构象选择性：严格识别具有完整三级结构的天然抗体，完全排除变性抗体的非特异性干扰
